五磨饮合四逆散配方颗粒与传统合煎剂的定性定量比较

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【摘要】目的:对五磨饮合四逆散配方颗粒和传统合煎剂进行定性定量比较。方法:采用薄层层析(TLC)进行定性比较和高效液相色谱法(HPLC)测定芍药苷的含量。结果:TLC结果显示,配方颗粒与合煎剂的化学成分种类相似,但合煎剂的斑点比配方颗粒的斑点更明显;HPLC研究表明,芍药苷在0.0355~0.426mg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为100.49%,RSD=1.07%(n=5),配方颗粒中芍药苷含量约为合煎剂的95%。结论:传统合煎剂与配方颗粒两者的化学成分基本相同,但芍药苷含量略有差异。

【关键词】五磨饮合四逆散;配方颗粒;芍药苷;HPLC;薄层层析;定性;定量

五磨饮合四逆散是五磨饮子和四逆散两个方剂的合方。五磨饮子首见于清?汪昂《医方集解》,由沉香、木香、槟榔、枳实、乌药5味中药组成,功效为破滞降逆,“治暴怒气厥卒死”[1]。四逆散出自《伤寒论》,由柴胡、白芍、枳实、甘草组成,用于治疗气郁证,四肢厥逆[2]。五磨饮合四逆散是在这两个方剂的基础上加减,由沉香、乌药、木香、枳壳、柴胡、白芍、甘草、薤白、黄连以及肉桂10味中药组成的合方,具有行气理气、和表解里、疏肝理脾等功效[3]。

中药配方颗粒是运用现代化科学技术将传统中药饮片分别提取、浓缩、干燥成的颗粒剂,使用时按处方剂量取各味配方颗粒,直接加热水溶解后饮用,具有不需煎煮、方便、快捷、安全、卫生等特点,更能适应现代快节奏的生活方式和临床应用的需要[4]。由于配方颗粒与传统煎剂的水煎方式不同(前者为分煎,而后者为合煎),可能存在提取成分的差异。为了比较两者之间的异同,本实验对五磨饮合四逆散的配方颗粒与合煎剂进行了薄层层析(TLC)定性比较和芍药苷高效液相色谱(HPLC)定量比较。现将实验方法与结果报道如下。

1实验材料

1.1仪器

LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津公司);BS224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);AS3120A超声波清洗器;LXJ-84-01离心机(北京医疗仪器修理厂)。

1.2试药

芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所,批号:110736,规格:95%;中药饮片与配方颗粒由深圳三九现代中药有限公司提供,根据生产记录,中药饮片为同批次配方颗粒生产原材料;乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层层析定性比较

2.1.1供试品溶液的制备

按日处方量称取药材,加10倍量水浸泡30min,煎煮20min,滤过;药渣再加入10倍量水,煎煮20min,滤过;合并两次滤液,减压浓缩至400mL,即得合煎剂母液。量取母液50mL,用石油醚(30~60℃)萃取2次,每次25mL,分取、合并石油醚层,减压浓缩至干。残留物用2mL甲醇溶解即得供试液A1。石油醚萃取后的水层,挥去残留的石油醚后,再用水饱和的正丁醇萃取2次,每次25mL,分取、合并正丁醇层,减压浓缩至干,残留物用2mL甲醇溶解作为供试液B1。

按日处方量取相应配方颗粒,加入400mL沸水溶解,作为配方颗粒母液。量取该母液50mL,以下按合煎剂供试液制备方法同样操作,分别制成配方颗粒供试液A2,B2。

2.1.2TLC比较分析

分别取供试液A1和A2各100mL,点样于同一硅胶薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开约15cm后,取出,晾干,在紫外灯(265nm)观察斑点的数量及荧光的强弱;然后喷10%硫酸乙醇液,加热至显色,日光下观察斑点的数量及色泽的深浅。

另分别取供试液B1和B2各40mL,点样于同一硅胶薄层板上,以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)下层为展开剂,展开约15cm后,取出晾干,喷10%硫酸乙醇液,加热至显色。日光下观察斑点的数量及色泽的深浅。

2.1.3结果

供试液A1和A2的TLC在紫外灯(265nm)下显示,两者的荧光斑点数量基本一致,但供试液A1的斑点比供试液A2的斑点更明显;喷10%硫酸乙醇液加热显色后,也显示了相同的结果;供试液B1和B2的TLC硫酸显色后,两者的斑点数量基本一致,但供试液B1的斑点比供试液B2的斑点更明显。

2.2芍药苷含量测定

2.2.1色谱条件

色谱柱:Intersil-ODS色谱柱(4.6mm×150mm,5mm);流动相:乙腈-水(15∶85);检测波长:230nm;流速:1mL/min;柱温:室温。

2.2.2供试品溶液的制备精密量取“2.1”项下合煎剂母液25mL,减压浓缩至干后,精密加入70%乙醇25mL,称质量,超声波震荡20min,加溶剂补足质量,离心(4000r/min)10min,精密量取上清液5mL,定容至25mL,作为合煎剂供试品溶液。另精密量取“2.1.1”项下配方颗粒母液25mL,按合煎剂供试液制备方法同样操作,制成配方颗粒供试品溶液。

2.2.3对照品溶液的制备

精密称定芍药苷对照品0.0071g,用50%甲醇配制成0.0355mg/mL的对照品溶液。

2.2.4标准曲线与线性关系考察

按“2.2.1”的色谱条件,分别精密吸取对照品溶液1、2、4、8、12mL,进样分析,以芍药苷的绝对进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为:

Y=1759.1X-6453.4(r=0.9999)

结果表明芍药苷在0.0355~0.4260mg范围的线性关系良好。

2.2.5阴性实验

按日处方量取除白芍配方颗粒以外的其他颗粒,按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液,精密吸取阴性对照溶液10mL,按“2.2.1”的色谱条件进行分析。阴性对照溶液在芍药苷色谱峰保留时间附近未见干扰峰,说明所确定的色谱条件可以用于芍药苷的含量测定。对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液的HPLC色谱图见图1。

2.2.6精密度试验

精密吸取芍药苷对照品溶液,重复进样5次,每次10mL,测定峰面积,并计算其RSD为0.67%(n=6),表明仪器精密度良好。

2.2.7稳定性试验

精密吸取芍药苷对照品溶液10mL,间隔2h进样1次,重复进样5次,测定峰面积值,计算其RSD为1.34%(n=5),表明芍药苷溶液在8h内稳定。

2.2.8重现性试验

精密称取同一批样品5份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.2.1”的色谱条件进行测定,计算样品中芍药苷含量的RSD为0.67%,表明分析方法重现性良好。

2.2.9加样回收率试验

精密量取已知芍药苷含量的样品5份,等量加入对照品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.2.1”的色谱条件进行测定,计算加样回收率,结果见表1。

2.2.10样品含量测定

按“2.2.2”项下方法制备配方颗粒和合煎剂的供试品溶液各5份,编号为1、2、3、4、5,进样测定,结果见表2。

2.2.11结果

配方颗粒和合煎剂中均可测定芍药苷的含量,但前者中的含量较后者低,约为后者的95%。

3讨论

五磨饮合四逆散配方颗粒和合煎剂的TLC比较结果表明,两者的脂溶性成分(石油醚萃取液)和水溶性成分(正丁醇萃取)的种类基本相同,但合煎剂显示斑点的色泽均较配方颗粒更明显。

本实验成功的建立了芍药苷含量的HPLC测定方法。并对方法的精密度、稳定性、重现性等进行了考察,结果显示该测定条件良好,可以用于五磨饮合四逆散配方颗粒及合煎剂中芍药苷的含量测定。

采用所建立HPLC法分别对五磨饮合四逆散配方颗粒和合煎剂中芍药苷的含量进行了测定和比较,结果显示配方颗粒中芍药苷的含量比合煎剂中的含量低,约为合煎剂中芍药苷含量的95%。

配方颗粒是适应现代快节奏生活方式而出现的,具有使用方便、便于携带、卫生等优点,正逐渐为人们所接受。虽然本实验的结果显示,五磨饮合四逆散配方颗粒与传统中药合煎剂之间的化学成分种类基本相同,但存在量的差异。但也不能据此就否认配方颗粒,尚需要更多的实验数据,特别是药效实验数据,才能证明两者的优劣。

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